Como coleta e preservação de amostras de sangue?

O sangue total é dividido em sangue não coagulado e anti-coagulado, de acordo com as condições de coleta. Ao mesmo tempo, o líquido amarelo superior que não foi separado por anticoagulação é chamado soro; O líquido amarelo superior que foi separado por anticoagulação é chamado de plasma. A temperatura e o tempo de armazenamento da amostra e as etapas do método do soro, plasma e separação celular também são fatores importantes que afetam os resultados do teste antes da análise. Após a coleta de sangue, as células sanguíneas precisam consumir alguns nutrientes devido ao metabolismo; portanto, ao medir esses componentes, precisam ser centrifugados no tempo para separar os componentes celulares. Preparamentos individuais antes da coleta de sangue, como o tempo de jejum, determinação da posição do paciente durante a coleta de sangue, etc.; tempo de aplicação de torniquete, infusão, exercício, seleção de anticoagulante e estabilizador; O processamento da amostra afetará o nível de alguns indicadores de detecção. Portanto, o processo de coleta de amostras deve ser padronizado para reduzir os erros pré -analíticos.

1. Não colete soro por anticoagulação:

1. Tubo de coleta de sangue sem aditivo vermelho: ele usa o princípio da coagulação do sangue natural para coagular o sangue, e o soro é naturalmente precipitado e depois centrifugado. Utilizado principalmente para bioquímica sérica (função hepática, função renal, enzimas miocárdicas, amilase, etc.), eletrólitos (potássio sérico, sódio, cloreto, cálcio, fósforo, etc.), função da tireóide, teste de drogas, testes de HIV, marcadores de tumores, etc. Teste de ciência da imunidade sérica.

2. Coleta com tubos de coagulação: use tubos de coagulação azul. Geralmente, é permitido permanecer por meia hora a 1 hora, e o soro é diretamente centrifugado para uso ou armazenamento e é frequentemente usado em bioquímica de emergência.

3. Coleta de tubos de coleta de sangue contendo gel e coagulante separadores: A parede do tubo de coleta de sangue é siliconizada e revestida com um coagulante para acelerar a coagulação do sangue e diminuir o tempo de detecção. O gel de separação é adicionado ao tubo do PET e o gel de separação tem uma boa afinidade com o tubo de estimação, que de fato atua como uma barreira. Normalmente, o gel de separação separa o componente líquido (soro) e o componente sólido (células sanguíneas) no sangue, mesmo em uma centrífuga comum. Separação e acumulação completas formam uma barreira no tubo de ensaio. Após a centrifugação, não são produzidas gotículas de óleo no soro, usadas principalmente para bioquímica sérica (função hepática, função renal, enzimas miocárdicas, amilase, etc.), eletrólitos (potássio sérico, sódio, cloreto, cálcio, fósforo, etc.),), etc.), etc. Função da tireóide, detecção de medicamentos, teste de AIDS, marcadores tumorais, imunologia sérica.

Vantagens do uso de tubos de coagulação:

1. Pode acelerar a coagulação dos glóbulos vermelhos; 2. Use o gel de separação para separar efetivamente o soro e evitar a hemólise;

Desvantagens da coleta de soro:

1. Os glóbulos vermelhos precisam ser totalmente coagulados, o que leva muito tempo; 2. O soro é relativamente pequeno e 1 ml de sangue total não é anticoagulado e apenas 0,2-0,3 ml de soro podem ser separados.

2. Coleção anticoagulante de plasma: o sangue inteiro anticoagulante é coletado, invertido suavemente, totalmente anticoagulante e o plasma pode ser diretamente separado por centrifugação para uso ou preservação.

De acordo com as características de desempenho de diferentes anticoagulantes, o anticoagulante apropriado é selecionado. Os anticoagulantes comumente usados ​​em laboratório são sal de heparina, tetraacetato de etilenodiamina e citrato de sódio.

1, anticoagulação da heparina: o anticoagulante mais usado, em circunstâncias normais, não interferirá nos indicadores relacionados, e a proporção de anticoagulação é grande (anticoagulação: sangue total = 1:30), nenhuma diluição do sangue. A heparina é um mucopolissacarídeo contendo um grupo de sulfato fortemente carregado negativamente que aumenta a inativação de serina proteases pela antitrombina III, impedindo assim a formação de trombina e impedindo vários efeitos anticoagulantes, como a agregação plaquetária. O efeito.

Os tubos de heparina são geralmente usados ​​para a detecção de alterações bioquímicas e hemorheológicas e são a melhor opção para a detecção de eletrólitos. A heparina sódio não deve ser usada quando os íons de sódio em amostras de sangue forem detectados para evitar afetar os resultados do teste. Também não pode ser usado para contagem e classificação de leucócitos porque a heparina causa agregação de leucócitos. Embora não houvesse diferenças significativas nas concentrações de eletrólitos obtidas por anticoagulação com os três sais de heparina, a heparina de lítio foi considerada a melhor. Isso ocorre principalmente porque acredita -se que a heparina sódio aumente o valor do sódio e a heparina amônio para aumentar o valor de amônia no sangue (medido pelo método de urease). A heparina pode inibir algumas enzimas de ferramentas comumente usadas na biologia molecular, como enzimas de restrição e enzimas Taq, afetando assim os resultados das experiências de PCR. Alguns métodos podem ser usados ​​para eliminar o efeito inibitório da heparina, como o uso da heparanase ou lavagem com buffer 2 ou mais vezes após a leucaferese. No entanto, muitos experimentalistas ainda relutam em usar a heparina como anticoagulante em experimentos de biologia molecular.

2, anticoagulação da EDTA: O ácido tetraacético de etileno diamina é um ácido amino-policarboxílico, pode efetivamente ligar os íons cálcio no sangue. O cálcio removerá o cálcio do local da reação e prevenirá e encerrará endógeno ou exógeno. A fonte do processo de coagulação sanguínea, impedindo assim a coagulação sanguínea, tem menos efeito na aglutinação das células sanguíneas e na morfologia das células sanguíneas do que outros anticoagulantes, de modo que os sais de EDTA (2K, 3K, 2NA) são comumente usados ​​como anticoagulantes. É usado para hematologia geral, mas não para coagulação, elementos de traço e PCR. Como os íons de metais pesados ​​do EDTA Chelates, algumas enzimas macromoleculares com íons metálicas terão uma grande perda ao usar esse anticoagulante. Especificamente, com base nas métricas medidas pelo cliente, era necessário usar o EDTA para anticoagulação.

3. Citrato de sódio: o citrato de sódio atua como um anticoagulante, agindo em íons de cálcio em amostras de sangue. A NCCLS recomenda uma proporção anticoagulante de 3,2% ou 3,8% para o sangue. É 1: 9 e é usado principalmente no sistema fibrinolítico (tempo de protrombina, tempo de trombina, tempo de tromboplastina parcial ativado, fibrinogênio). Deve -se prestar atenção à quantidade de sangue coletada para garantir a precisão dos resultados do teste, e o sangue deve ser delicadamente invertido e misturado 5 a 8 vezes imediatamente após a amostragem. Como a proporção anticoagulante é pequena (anticoagulante: sangue total = 1: 9), o sangue tem uma certa diluição e geralmente não é recomendada.

Precauções para escolher a anticoagulação:

1. A quantidade de anticoagulante adicionada em cada amostra deve ser a mesma, e a quantidade de sangue total coletado deve ser o mais consistente possível.

2. Certifique -se de reverter todo o sangue anticoagulado suavemente. Anticoagulação completa, para impedir que parte do sangue entre em contato com o anticoagulante e causando coagulação

3. Colete mais plasma do sangue total anticoagulante (0,4-0,5 ml de plasma pode ser separado do sangue inteiro anticoagulante de 1 ml);

4. Depois que o plasma coletado é congelado e armazenado, a turbidez da floculação pode ocorrer durante o processo de descongelamento e pode ser centrifugado para remover a turbidez para determinação, se necessário. Após a coleta, o soro e o plasma não são determinados por tempo e podem ser armazenados imediatamente. Quanto menor a temperatura, melhor. Se a temperatura não for repetida no meio, ela poderá ser armazenada abaixo de -20 ° C por 1 mês e abaixo de -70 ° C por 3 meses.

Três, a velocidade centrífuga usada para coletar soro e plasma: ao separar o soro ou o plasma, de acordo com as diferentes espécies, a velocidade centrífuga também é diferente, a velocidade centrífuga recomendada é: 1, camundongos: geralmente 1000-1500 rpm, centrifugação para 8 -10 minutos; 2 ratos, coelhos: geralmente 2000-2500 rpm, centrifugação por 8 a 10 minutos; 3, Pessoas: General 2500-3000 rpm, centrifugação por 8 a 10 minutos. Quarto, o efeito de altos fatores lipídicos e hemolíticos:

Impacto da hemólise: o impacto da hemólise em alguns dos indicadores testados depende não apenas do método usado, mas também do instrumento analítico utilizado. O método de medição de comprimento de onda duplo pode eliminar a interferência de cor da hemoglobina até certo ponto, mas não pode eliminar completamente a interferência da hemoglobina, especialmente quando a hemoglobina reage com o reagente usado. Em geral, a hemólise leve não interferiu significativamente na determinação da maioria dos indicadores de química clínica.

A hemólise grave pode ter dois efeitos: (1) Quando a concentração do componente testado é maior no PBC do que no plasma, os resultados do ensaio são maiores; (2) Quando a concentração da fração testada no RBC foi menor que o efeito plasmático, a fração testada foi ligeiramente diluída.